Лабораторная диагностика вирусных гепатитов

Методы исследования при диагностике гепатита В и С

Задача обследования — выявление вируса, определение его вида, активности, степени поражения клеток печени. Только на основании результатов исследования ставят окончательный диагноз, подбирают метод лечения, также используют их для оценки эффективности проводимой терапии. Лабораторная диагностика гепатита проводится методом исследования разных показателей крови.

Для культивирования
вирусов в лабораторных условиях
используются ледуюшие живые объекты:
1) культуры клеток (тканей, органов); 2)
куриные мбрионы; 3) лабораторные животные.

Другие показатели

Помимо ПЦР-диагностики, очень важно оценить количество ферментов печени. Поражение тканей органа сопровождается попаданием в кровь ферментов, что влечет их увеличение в составе плазмы. В нормальном состоянии количество АСАТ составляет 5-35 Ед.

/л, а АЛАТ – 5-40 Ед./л.Лабораторная диагностика вирусных гепатитов должна включать определение плазматической активности щелочной фосфатазы. В случае развития гепатита она увеличивается. В норме данный показатель составляет 30-115 Ед./л.

Немаловажное значение имеет оценка фракций билирубина – свободного и связанного. Его повышение обусловлено неспособностью клеток печени выводить из организма данный пигмент. В норме концентрация связанного билирубина составляет 0,1-0,3 мг/дл, а свободного – 0,2-0,7 мг/дл.

Классификация вирусных инфекций Уровень клетки

Наибольшее распространение имеют
однослойные культуры клеток, которые
можно разделить на 1) первичные (первично
трипсинизированные), 2) полуперевиваемые
(диплоидные) и 3) перевиваемые.

По
происхождению
они классифицируются на эмбрионштьные,
опухолевые и из взрослых организмов;
по морфогенезу
— на фибробластные, эпителиальные и др.

Первичные
культуры клеток — это клетки какой-либо
ткани человека или животного, которые
имеют способность расти в виде монослоя
на пластмассо­вой или стеклянной
поверхности, покрытой специальной
питательной средой.

Срок жизни таких
культур ограничен. В каждом конкретном
случае их получа­ют из ткани после
механического измельчения, обработки
протеолитическими ферментами и
стандартизации количества клеток.
Первичные культуры, полу­ченные из
почек обезьян, почек эмбриона человека,
амниона человека, куриных эмбрионов,
широко используются для выделения и
накопления вирусов, а также для
производства вирусных вакцин.

Полуперевиваемые
(или диплоидные)
культуры клеток — клетки одного типа,
способные in vitro выдерживать до 50-100
пассажей, сохраняя при этом свой исходный
диплоидный набор хромосом. Диплоидные
штаммы фибробластов эмбриона человека
используются как для диагностики
вирусных инфек­ций, так и при производстве
вирусных вакцин.

Перевиваемые
клеточные линии характеризуются
потенциальным бес­смертием и
гетероплоидным кариотипом.

Источником
перевиваемых линий могут быть первичные
клеточные культуры (например, СОЦ, ПЭС,
ВНК-21 — из почек однодневных сирийских
хомяков; ПМС — из почки морской свинки
и др.) отдельные клетки которых
об­наруживают тенденцию к бесконечному
размножению in vitro.

Другим источником
перевиваемых клеточных линий являются
злокачест­венные новообразования. В
этом случае трансформация клеток
происходит in vivo. Наиболее часто в
вирусологической практике применяются
такие линии перевиваемых клеток: HeLa —
получена из карциномы шейки матки;

Для культивирования
клеток необходимы питательные среды,
которые по своему назначению делятся
на ростовые и поддерживающие. В составе
росто­вых питательных сред должно
содержаться больше питательных веществ,
чтобы обеспечить активное размножение
клеток для формирования монослоя.

Широкое применение
находят стандартные синтетические
среды, напри­мер, синтетическая среда
199 и среда Игла. Независимо от назначения
все пита­тельные среды для культур
клеток конструируются на основе
сбалансированно­го солевого раствора.

Чаще всего им является раствор Хенкса.
Неотъемлемый компонент большинства
ростовых сред — сыворотка крови животных
(телячья, бычья, лошадиная), без наличия
5-10% которой размножение клеток и
форми­рование монослоя не происходит.
В состав поддерживающих сред сыворотка
не входит.

Выделение
вирусов в культурах клеток и методы их
индикации.

Предлагаем ознакомиться:  Курение кальяна приводит к импотенции

При выделении
вирусов из различных инфекционных
материалов от больного (кровь, моча,
фекалии, слизистые отделяемые, смывы
из органов) применяют культуры клеток,
обладающие наибольшей чувствительностью
к предполагаемому вирусу.

Для заражения
используют культуры в пробирках с хорошо
развитым монослоем клеток. Перед
заражением клеток питательную среду
удаляют и в каждую пробирку вносят по
0,1-0,2 мл взвеси испытуемого материала,
предварительно обработанного антибиотиками
для уничтожения бактерий и грибов.

2) обнаружение
внутриклеточных включений, располагающихся
в цитоплазме и ядрах пораженных клеток;

3) положительная
реакция гамагтлютинации (РГА);

4) положительная
реакция гемадсорбции (РГАдс);

5) феномен
бляшкообразования: монослой зараженных
вирусом клеток покры­вается тонким
слоем агара с добавлением индикатора
нейтрального красно­го (фон — розовый).
При наличии вируса в клетках образуются
бесцветные зоны («бляшки») на розовом
фоне агара.

6) при отсутствии
ЦПД или ГА можно поставить реакцию
интерференции : ис­следуемая культура
повторно заражается вирусом, вызывающим
ЦПД. В по­ложительном случае ЦПД будет
отсутствовать (реакция интерференции
по­ложительная). Если в исследуемом
материале вируса не было, наблюдается
ЦПД.


Автономнаяинфекция
Интеграционная
инфекция

продуктивная
абортивная
Интеграция полного
генома
Интеграция части генома

острая
хроническая
острая

Неоплатическая
трансформация
Отсутстие
трансформации

цитолитическая
нецитолитическая

Инструментальные исследования

Эффективным диагностическим методом является УЗИ печени и других органов брюшной полости. Ультразвуковое исследование показывает состояние сосудов и ткани органа. На мониторе врач видит полную картину воспалительного процесса.

Во время УЗИ определяются размер и плотность печени. При необходимости дополнительно исследуются желудок, поджелудочная железа. Недостатком УЗИ является то, что просматриваются исключительно поверхностные изменения органа.

Инструментальные методы диагностики гепатита включают в себя эластометрию. Это современный и наиболее эффективный способ в короткие сроки поставить верный диагноз. Эластометрия проводится с помощью фиброскана.

Часто у пациентов присутствуют сразу несколько типов вирусного гепатита. В связи с этим логично проводить комплексную поэтапную диагностику. Сначала врач опрашивает пациента и пальпирует органы брюшной полости.

Чтобы обследовать органы брюшной полости, обычно применяют ультразвуковое исследование. Это достаточно простой метод, который помогает визуализировать увеличение печени и других органов, а также оценить происходящие в них изменения.

Также с помощью УЗИ оценивается состояние сосудов. Если же врач планирует сделать пункционную биопсию, данный метод поможет выбрать оптимальное место для прокола.С помощью данного аппарата удается увидеть на мониторе определенные сечения внутренних органов.

В результате можно визуализировать локальные изменения в них – камни, опухолевые образования и т.д.Неправильные результаты можно получить исключительно в том случае, если работа органа нарушается на клеточном уровне.

Вследствие этого весь орган поражен. К примеру, при изменении клеток печени удастся обнаружить нарушение оттенка тканей. Однако информацию относительно характера и тяжести болезни получить не удастся.

В такой ситуации проводится пункционная биопсия. Это наиболее точная методика, которая позволяет получить максимальное количество информации. С помощью данного способа оценивается структура тканей печени, что позволяет наиболее точно диагностировать гепатит.

Выделение вирусов из фекалий, их индикация и индентификация при кишечных вирусных инфекциях

Лабораторные
животные могут быть использованы для
выделения виру­сов из инфекционного
материала, когда невозможно применить
более удобные системы (культуры клеток
или куриные эмбрионы). Берут преимущественно
новорождённых белых мышей, хомяков,
морских свинок, крысят.

Индикация вируса
основана на появлении признаков
заболевания у жи­вотных, их гибели,
патоморфологических и патогистологических
изменений в тканях и органах, а также
по положительной реакции гемагглтотинации
с экс­трактами из органов.

Суспензия фекалий,
обработанная антибиотиками, осветлённая
центрифугированием

Заражение мышей
Заражение культур клеток

Параличи, гибель
Пикорновирусный
тип ЦПД
Реовирусный тип ЦПД
Аденовирусный
тип ЦПД

РН, РСК

РСК, РН по цветной
пробе
ИФ, РН, РТГА
РТГА, РСК, РН

Коксаки А, В, ротавирусы

энтеровирусы
аденовирусы
ротавирусы

Предлагаем ознакомиться:  Фетоплацентарная недостаточность (ФПН) при беременности - степени, причины, симптомы, риски, лечение, диагностика и профилактика

Особенности диагностики во время беременности

Гепатит у беременных – очень опасная патология, поскольку она практически всегда провоцирует нарушения в развитии плода. При поражении вирусом типа В практически всегда заражается и ребенок. Наличие гепатита С у беременных провоцирует несколько иную картину.

Тем не менее, нельзя сказать, развитие данного заболевания у беременных спровоцирует инфицирование малыша.Чтобы провести правильную диагностику, прежде всего нужно сдать анализ крови и провести ПЦР-диагностику.

При гепатите В у беременных имеет значение наличие HBsAg и НВеАg. Если они присутствуют, риск заражения ребенка повышается. В такой ситуации также уменьшается эффективность вакцины для беременных.Если же будущая мама заболевает гепатитом С, инфицирование ребенка происходишь лишь в 5 % случаев.

При этом данный вид заболевания передается от беременных к плоду лишь при условии активного протекания недуга. В большинстве случае ребенок заражается от матери при родах.При выявлении вирусного гепатита у беременных обязательно требуется стационарная терапия.

Если у женщин развивается цирроз печени, нужно принимать все меры, чтобы беременность и вовсе не наступила. Дополнительные нагрузки на организм, которые возникают у беременных, спровоцируют сильное обострение болезни.

При хронизации процесса беременность не оказывает влияния на клиническую картину патологии. Иногда у беременных женщин воспаления в печени и вовсе прекращаются. Однако нужно быть готовой к тому, что после родов гепатит резко обострится. Потому так важно держать данный процесс под контролем.

Вирусные заболевания, их особенности


1) вирусные инфекции,

1. Вирусные инфекции
— широко распространённые. Их удельный
вес в струк­туре инфекционной
заболеваемости может составить 60-80%.

2. Внутриклеточное
размножение вирусов приводит к массовой
гибели клеток организма.

3. Размножение
некоторых вирусов (ВИЧ, вирусы кори,
гепатита В, С) в клет­ках иммунной
системы приводит к развитию иммунодефицитного
состояния.

4. Способность
некоторых вирусов интегрироваться с
геномом клетки (ВИЧ, вирус гепатита В,
онкогенные РНК-содержащие вирусы).

5. Некоторые вирусы
(краснухи, цитомегалии) обладают
тератогенным дейст­вием.

6. Инфекционные
вирусы могут провоцировать развитие
опухолей (аденовирусы, герпесвирусы,
вирусы гепатитов В, С, G).


7. Вирусы могут
вызывать медленные инфекции (ВИЧ, вирусы
кори, бешенст­ва, гепатита В, герпеса
и др.).

8. Иммунопрофилактика
многих вирусных инфекций отсутствует.

9. Диагностика
вирусных заболеваний применяется не в
каждом конкретном случае из-за массовости
этих заболеваний.

10.До настоящего времени недостаточно
эффективных средств для лечения ви­русных
заболеваний.

Особенности дифференциальной диагностики

Важно вовремя отличить вирусный гепатит от лучевого, аутоиммунного и токсического. Для этого проводится дифференциальная диагностика. На начальной стадии вирусное поражение печени часто путают с алкогольным.

Заболевания развиваются по одинаковой схеме. При вирусном гепатите желтушность кожи и слизистых оболочек присутствует длительное время. Болевой и диспепсический синдромы практически отсутствуют. Температура тела повышается редко.

Общий анализ крови играет важную роль в дифференциальной диагностике. При алкогольном гепатите отмечается ярко выраженный лейкоцитоз. Нейтрофильная формула сдвигается влево. Вирусный гепатит А (B, C или D) характеризуется вялотекущим воспалительным процессом, поэтому количество лейкоцитов увеличивается незначительно.

Дифференциальная диагностика включает в себя также биопсию печени. Цель процедуры — исследовать живую ткань органа. Во время биопсии определенное количество клеток печени забирается через иглу в шприц.

Дифференциальная диагностика проводится для того, чтобы отличить вирусный гепатит от острых поражений печени, связанных с воздействием химических веществ. Особенно важно провести диф диагностику алкогольной формы заболевания.

На начальном этапе развития этого недуга часто ставят ошибочный диагноз, принимая его за вирусный гепатит. Это происходит в 50 % случаев.Чтобы провести диф диагностику этих процессов, нужно учитывать, что алкогольный гепатит развивается исключительно на фоне постоянного употребления большого количества спиртного. Важными критериями диф диагностики в данном случае является следующее:

  • отсутствие или кратковременность преджелтушного этапа;
  • быстрый спад желтухи;
  • преобладание болевого и диспепсического синдромов;
  • развитие лихорадки;
  • высокая плотность печени.
Предлагаем ознакомиться:  Особенности диагностики вирусных гепатитов

Также при диф диагностике делают анализ крови. С помощью этого исследования удается выявить лейкоцитоз – довольно часто он составляет более 15-20 тыс. Также наблюдается нейрофилез, который характеризуется сдвигом нейтрофильной формулы влево.

Немаловажным критерием при диф диагностике являются данные биохимического исследования. Алкогольный гепатит характеризуется билирубинаминотрансферазной диссоциацией.В сложных случаях диф диагностика проводится с помощью биопсии печени.

При алкогольном гепатите преобладает поражение центральных зон долек. Также диф диагностика показывает ожирение гепатоцитов и нейтрофильную инфильтрацию. В отдельных случаях по результатам диф диагностики удается выявить алкогольный гиалин.

Своевременно проведенная диагностика вирусных гепатитов позволяет правильно подобрать лечение и не допустить развития опасных осложнений. Она проводится с помощью различных методов – ПЦР, УЗИ и т.д. Немаловажное значение имеет и выполнение диф диагностики.

Принципы терапии и профилактики вирусных инфекций

1
группа —
Аномальные нуклеозиды — аналоги
предшественников нуклеи­нового
обмена, ингибируют функции вирусных
полимераз или включаются в цепочку
нуклеиновой кислоты, делают её
нефункциональной.

Аналог пиримидина
— йоддезоксиуридин применяется для
лечения гер­петических кератитов,
кожного герпеса и цитомегалии. Пуриновые
аналоги — видорабид применяют для лечения
герпетических энцефалитов, ветряной
оспы и опоясывающего герпеса.

Ацикловир
(зовиракс) — используют также для лече­ния
разных видов герпетической инфекции.
Рибовирин (виразол) — эффективен против
РНК- и ДНК-содержащих вирусов. Для лечения
ВИЧ-инфекции получе­ны нуклеозидные
аналоги, ингибирующие обратную
транскриптазу ВИЧ, ази-дотимидин
(зидовудин), тимазид (фосфатид), хивид
(зальцитабин).

2
группа
производные адамантанамина гидрохлорида.
Препараты: амантадин и ремантадин
ингибиругот репродукцию вирусов гриппа,
кори, крас-

нухн. Наиболее
эффективны в отношении гриппа А. Механизм
действия на­рушение депротеинизации
вируса.

3
группа —
тиосемикарбазоиы. Препарат метисазои
(марборап) активен против вирусов
натуральной оспы. Механизм действия
препарата заключается в подавлении
синтеза вирусных белков и сборки вирусных
частиц.

4
группа
ингибиторы протеолитической активности
вирусов. Сущность этого феномена
заключается в том, что многие белки
пикориа-, орто-, адено-, тога-, ретровирусов
приобретают вирусную активность лишь
после разрезания этих белков на фрагменты
ферментами протеазами.

Используют
ингибиторы протеаз, такие как горлокс,
контрикал, s-аминокапроновую кислоту,
при лече­нии инфекций, вызванных этими
вирусами. В нашей республике для лечения
ВИЧ-инфекции используют препарат этой
группы — инвиразу (саквннавир).

5
группа. Одно
из новых и перспективных направлений
химиотерапия создание препаратов типа
«нуклеаз», способных повреждать вирусные
гены, что даст возможность лечить
интеграционные вирусные болезни.

6
группа
интерфероны. В настоящее время используется
-ннтерферон
(лейкоцитарный ИФ) как для лечения, так
и для профилактики, особенно рес­пираторных
вирусных инфекций. Механизм действия
— нарушение синтеза ви­русных белков.

Широкое применение получил -интерферон
или иммунный интерферон. -интерферон
усиливает функцию Т-киллеров и естественных
кил­леров, Т-эффекторов ГЗТ. Используется
для лечения злокачественных опухолей
и вирусных инфекций.

7
группа —
вирусспецифические иммуноглобулины.
которые получают из крови реконвалесцентов
или специально вакцинированных доноров.
Использу­ются для профилактики кори,
гепатитов А, В, гриппа, парагриппа и
других ви­русных инфекций (для
профилактики бешенства используется
антирабический иммуноглобудин, полученный
из крови иммунизированных животных).
Ig
ин­терферируют с вирионами, предотвращают
адсорбцию вируса на чувствитель­ных
клетках.

8
группа —
Вакцины. Для профилактики ряда вирусных
инфекций в на­стоящее время используют
убитые вакцины, содержащие ипактивировашше
формалином или -цропнолактоном
вирусы (вакцина против гриппа, кори,
по­лиомиелита, японского и клещевого
энцефалитов, бешенства), живые
(аттенуированные) вирусные вакцины,
содержащие вирусы с ослабленной
вирулент­ностью (вакцина против
гриппа, кори, эпидемического паротита,
краснухи, по­лиомиелита, бешенства,
жёлтой лихорадки и др.);

субъедипичные
вакцины, со­держащие вирусные
протективные антигены (субъединицы)
(вакцине против гриппа); рекомбипантные
(генно-инженерные) вакцины (вакцина
против гепа­тита В, для получения
которой ген, кодирующий HBs-антиген,
внедрен в геном дрожжевой клетки). В
стадии разработки находятся синтетические
вакцины.

Рейтинг
( Пока оценок нет )
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Мужское здоровье

Отправить ответ

avatar
  Подписаться  
Уведомление о
Adblock detector